dinamikus BIOSSENSORS heliX plus Reduction Agent Kit 1
Főbb jellemzők
- Lehetővé teszi a diszulfid kötések redukcióját TCEP segítségével.
- Kompatibilis fehérjékkel és antitestekkel (MW > 20 kDa).
- Az antitestek helyspecifikus csökkentése.
- A redukált molekulák azonnali kapcsolása lehetséges (lásd a HK-MAL felhasználói kézikönyvet).
- Egyszerre több ligandum redukciója is végrehajtható.
- Reagenseket tartalmaz két egyedi redukciós reakcióhoz.
Termékleírás
Rendelési szám: RK-PA-1
Táblázat 1. Tartalom és tárolási információk
| Anyag | Sapka | Összeg | Tárolás |
| TCEP (500 mM) | Piros | 2 x 20 µl | -20°C |
| Puffer csökkentése [1] | Fehér | 2 x 1.8 ml | -20°C |
| Tisztító centrifuga oszlop | Piros | 4 x | 2-8°C |
| 2.0 ml-es reakciócsövek tisztítási centrifugáláshoz | 4 x | RT | |
| Centrifugális szűrőegység (10 kDa MWCO) | 2 x | RT | |
| Centrifugáló gyűjtőcső | 4 x | RT |
Kizárólag kutatási célra.
Ennek a terméknek korlátozott az eltarthatósága, kérjük, nézze meg a lejárati dátumot a címkén.
| FONTOS | A termékeket eltérő hőmérsékleten lehet szállítani, de a tárolás során be kell tartani a táblázatban szereplő irányelveket. A tisztító centrifugálási oszlopban lévő gyantaszuszpenzió 0.02% nátrium-azidot tartalmaz. |
További anyagok szükségesek
Táblázat 2. További anyagok
| Anyag | Megjegyzések |
| Asztali mikrocentrifuga | A szükséges sebességtartomány 1,000 xg és 13,000 XNUMX xg között van |
| Örvény | |
| 1.5 ml-es reakciócsövek |
A készlet minden szükséges oldatot és puffert tartalmaz.
Biomolekula 3 lépéses redukciója reakciócsőben
Mielőtt elkezdené, olvassa el a teljes protokollt és megszakítás nélkül hajtsa végre az összes lépést.
| TIPP | Ez a protokoll egyidejűleg több kapcsolási reakcióhoz is végrehajtható |
Fehérje/antitest puffercseréje
- Nedvesítse meg a centrifugális szűrőegység membránját 100 µL redukáló pufferrel.
- Adjunk hozzá kb. 200 µg (legfeljebb 500 µg) fehérje/antitest a szűrőegységhez az 1. lépéstől. Ha szükséges, adjon hozzá redukáló puffert a szűrőhöz, amíg el nem éri a 450 µL maximális térfogatot, és centrifugálja 13,000 14,000 xg-vel (5 XNUMX xg-ig) XNUMX percig. min és dobja ki az átfolyást.
- Adjon hozzá 350 µL redukálópuffert, és centrifugálja 13,000 5 xg-vel XNUMX percig, majd dobja ki ismét az átfolyó anyagot.
- Ismételje meg a 3. lépést még egyszer 10 perces végső centrifugálási idővel, hogy a végső térfogat kb. 80 µl.
- Gyűjtse samp100 µl-es pipettával egy új csőbe, vagy a szűrőeszközt fejjel lefelé egy új centrifugális csőbe helyezve centrifugálja 2 percig 1000 x g-vel.
Csökkentés TCEP-vel
- Készítsen 2.5 mM TCEP oldatot redukáló pufferben úgy, hogy 1 µl 500 mM TCEP-t ad a 199 µl redukálópufferhez.
Mindig közvetlenül használat előtt készítse elő. - Adja hozzá a redukáló puffert az s-hezamp98 µL 2 mM TCEP-oldatot adjunk hozzá az 2.5 µM végkoncentráció eléréséhez. A reakciót fel-le pipettával keverjük össze.
- Inkubálja az oldatot 37 °C-on 400 ford./perc sebességgel 2 órán át a teljes redukció biztosítása érdekében.
Tisztítás és koncentrálás
- Egy TCEP-kimosáshoz két tisztító centrifugálási oszlopot (piros kupak) állítson be:
a. Távolítsa el az oszlop alsó tömítését, és lazítsa meg a kupakot (ne távolítsa el a kupakot).
b. Helyezze az oszlopot egy 2.0 ml-es reakciócsőbe.
c. Centrifugálja 1,500 × g-vel 1 percig a tárolóoldat eltávolításához.
d. Adjon hozzá 400 µL redukáló puffert az oszlop gyantaágyához. Centrifugálja 1,500 × g-vel 1 percig a puffer eltávolításához.
e. Ismételje meg a d lépést, és dobja ki a kapott puffert a reakciócsőből. A tisztító centrifugálási oszlopnak most száraz állapotban kell lennie.
TCEP mosás
a. Helyezze az előző lépés oszlopait új 1.5 ml-es reakciócsövekbe.
b. Távolítsa el az 1-es számú centrifuga kupakját, és finoman öntse rá az sample a gyantaágy tetejére.
c. Centrifugálja 1,500 xg-vel 2 percig, hogy összegyűjtse a szample (átfolyás). Használat után dobja ki a tisztító centrifugálási oszlopot.
d. Távolítsa el a 2-es számú centrifugális oszlop kupakját, és öntse a sample az előző lépésről a gyantaágyra.
e. Centrifugálja 1,500 xg-vel 2 percig, hogy összegyűjtse a szample (átfolyás). Használat után dobja ki a tisztító centrifugálási oszlopot.
f. Tiol csatlakozás a használati utasítás szerint (HK-MAL-1 vagy HK-MAL-2), csökkentett sample lehet végezni.
További információk
Puffercsere és koncentrálás centrifugális szűrőegységekkel
- Vegyen egy centrifugális szűrőegységet, adjon hozzá megfelelő mennyiségű puffert a szűrőberendezésbe, és zárja le.
- Helyezze a kupakkal ellátott szűrőeszközt a centrifuga rotorjába úgy, hogy a sapka hevederét a rotor közepe felé igazítsa; ellensúlyozni egy hasonló eszközzel.
- Forgassa meg a készüléket 13,000 14,000 xg (vagy XNUMX XNUMX xg) sebességgel a megadott ideig.
- Távolítsa el az átfolyót, és ismételje meg az 1-3. lépéseket.
- Vegye ki az összeszerelt eszközt a centrifugából, és válassza le a szűrőeszközt a mikrocentrifuga csőről.
- A konjugátum visszanyeréséhez helyezze a szűrőeszközt fejjel lefelé egy tiszta centrifugális csőbe, a nyitott kupakot a rotor közepe felé igazítva; hasonló eszközzel ellensúlyozni. Pörgessen 2 percig 1,000 xg-vel az s átviteléhezample a készülékből a csőbe.
Hasznos rendelési számok
Táblázat 3. Rendelési számok
| Termék neve | Összeg | Rendelési szám |
| heliX ® Thiol csatlakozókészlet 1 | 5 x | HK-MAL-1 |
| heliX ® Thiol csatlakozókészlet 2 | 5 x | HK-MAL-2 |
| Centrifugális szűrőegység (3 kDa MWCO) | 5 db. | CF-003-5 |
| Centrifugális szűrőegység (10 kDa MWCO) | 5 db. | CF-010-5 |
| 10x A puffer [2] | 50 ml (kitermelés 500 ml) | BU-P-150-10 |
| 5x B puffer [3] | 50 ml (kitermelés 250 ml) | BU-P-1000-5 |
Érintkezés
| Dynamic Biosensors GmbH | Dynamic Biosensors, Inc |
| Perchtinger Str. 8/10 | 300 Trade Center, Suite 1400 |
| 81379 München | Woburn, MA 01801 |
| Németország | Egyesült Államok |
Rendelési információk order@dynamic-biosensors.com
Műszaki támogatás support@dynamic-biosensors.com
- Puffer csökkentése: 100 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 5 mM EDTA, pH 7.4
- A puffer: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 150 mM NaCl, pH 7.2
- B puffer: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 1 M NaCl, pH 7.2
ÜGYFÉL TÁMOGATÁS
www.dynamic-biosensors.com
A műszereket és chipeket Németországban tervezték és gyártják.
©2024 Dynamic Biosensors GmbH | Dynamic Biosensors, Inc. Minden jog fenntartva.
Dokumentumok / Források
 |
dinamikus BIOSSENSORS heliX plus Reduction Agent Kit 1 [pdf] Felhasználói kézikönyv RK-PA-1, heliX plus 1. redukálószer készlet, heliX plus, 1. redukálószer készlet, 1. szerkészlet, 1. készlet |
